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凱氏定(ding)(ding)氮法是(shi)(shi)由丹麥化(hua)學家凱道爾于1883年建立的(de)。凱氏定(ding)(ding)氮法是(shi)(shi)測定(ding)(ding)化(hua)合(he)物(wu)或混合(he)物(wu)中(zhong)(zhong)總氮量(liang)(liang)(liang)的(de)一種(zhong)方法。即在有催(cui)化(hua)劑的(de)條件(jian)下,用濃硫酸消化(hua)樣品(pin)(pin)將有機(ji)氮都(dou)轉變(bian)成(cheng)無機(ji)銨(an)鹽(yan),然后在堿(jian)性(xing)條件(jian)下將銨(an)鹽(yan)轉化(hua)為(wei)氨,隨水蒸氣(qi)蒸餾出來并為(wei)過量(liang)(liang)(liang)的(de)硼(peng)酸液吸收,再(zai)以標(biao)準鹽(yan)酸滴(di)定(ding)(ding),就可計(ji)算出樣品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)的(de)氮量(liang)(liang)(liang)。由于蛋(dan)(dan)白(bai)質含(han)氮量(liang)(liang)(liang)比較恒定(ding)(ding),可由其氮量(liang)(liang)(liang)計(ji)算蛋(dan)(dan)白(bai)質含(han)量(liang)(liang)(liang),故此法是(shi)(shi)經(jing)典的(de)蛋(dan)(dan)白(bai)質定(ding)(ding)量(liang)(liang)(liang)方法。
根據凱氏定(ding)氮原理測定(ding)需要三個步驟,即消化、蒸(zheng)餾、滴(di)定(ding)。
消化:將含氮的有機化合物(蛋白質)與濃硫酸和催化劑(硫酸銅或凱氏消化片)一同加熱,使蛋白質分解,其中碳和氫被氧化成二氧化碳和水逸出,而樣品中的有機氮轉化為氨(NH3)并與硫酸結合形成硫酸銨。(銨 NH4+)
消化過程:微火加熱煮沸,燒瓶內物質炭化變黑,產生大量泡沫,泡沫消失后加大火力保持微沸狀態,至液體成藍綠色澄清狀態后繼續加熱 05-1h,結束后冷卻。
蒸(zheng)餾:得到的溶(rong)液(ye)經稀釋(shi)定容后加(jia)入NaOH,蒸(zheng)餾釋(shi)放出(chu)NH3,冷凝之后收集于硼酸溶(rong)液(ye)中。
蒸餾過程:先將消(xiao)化好的樣品進行稀釋(shi),加入(ru)(ru)NaOH,經(jing)過加熱(re)后(hou)產(chan)生(sheng)的氨氣進入(ru)(ru)冷凝(ning)管,經(jing)過冷凝(ning)之后(hou)流入(ru)(ru)裝有硼酸(suan)溶液的接收瓶中(zhong)。形成(cheng)硼酸(suan)銨。(硼酸(suan)溶液中(zhong)加有混(hun)合指示劑(ji),形成(cheng)硼酸(suan)銨之后(hou)吸收液由(you)酸(suan)性變(bian)為(wei)(wei)堿性,顏色由(you)紫紅轉變(bian)為(wei)(wei)藍綠色。)
滴定(ding):用(yong)已知(zhi)濃度的(de)(de)鹽酸標準(zhun)溶(rong)液(ye)進行滴定(ding),根據(ju)鹽酸消耗的(de)(de)量(liang)(liang)來計(ji)(ji)算(suan)出氮的(de)(de)含(han)量(liang)(liang),然后乘(cheng)以相(xiang)應(ying)的(de)(de)換算(suan)因(yin)子,即得到蛋白質的(de)(de)含(han)量(liang)(liang)。(滴定(ding)是指(zhi)一種(zhong)定(ding)量(liang)(liang)分析(xi)的(de)(de)手段,也是一種(zhong)化學實(shi)驗(yan)操作。它通(tong)過兩種(zhong)溶(rong)液(ye)的(de)(de)定(ding)量(liang)(liang)反應(ying)來確定(ding)某種(zhong)溶(rong)質的(de)(de)含(han)量(liang)(liang),是根據(ju)指(zhi)示(shi)劑的(de)(de)顏色變化指(zhi)示(shi)滴定(ding)終點(dian),然后目測標準(zhun)溶(rong)液(ye)消耗體積,計(ji)(ji)算(suan)分析(xi)結果)
滴定過程:用鹽酸標準溶液滴入硼酸銨溶液中,使溶液的顏色由藍綠色變為淺紅色。
德瑞克儀器股份根據原理研發了德瑞克凱氏定氮儀,產品一經推出便引起了市場關注。
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